孔令非
医学博士，主任医师（二级），
教授，硕士导师
河南省人民医院病理科主任
河南省病理质控中心主任
河南省学术技术带头人
中国医师协会病理科医师分会副会长
中国病理质控评价中心专家委员会委员
河南省医师协会病理学分会会长
河南省医学会病理专业委员会
第七,八届主任委员
中国阴道镜和宫颈病理分会（CSCCP）常务委员 中华医学会病理学专业委员会委员
《临床与实验病理学杂志》常务编委
《中华病理学杂志》，《诊断病理学杂志》编委
从事肿瘤病理研究及诊断30年
在中枢神经系统肿瘤，妇科肿瘤，
乳腺肿瘤及肺癌方面有一定研究
先后发表论文80余篇
参编专著3部，获省部级科研成果4项
PD-L1检测的临床意义
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的一类疾病，随着老年化程度的增加，恶性肿瘤的发病率和死亡率在逐年上升。目前恶性肿瘤的治疗手段包括手术、放疗、化疗或靶向治疗，但疗效并不尽如人意，同时也存在副作用大等一些问题。
近年免疫治疗是肿瘤治疗领域的一个突破，很多免疫治疗药物针对的位点是PD-1／PD-L1，这些药物能够很好的和PD-1／PD-L1结合，使肿瘤对于T细胞的束缚减轻或消失，使T细胞功能得以重塑，进而抑制肿瘤细胞甚至消灭肿瘤细胞，达到一个很好的治疗目的。PD-L1是目前已进入临床实践的免疫治疗生物标志物，在某些情况下也可预测免疫治疗的疗效，甚至治疗决策。因此，规范地进行PD-L1检测就显得十分重要。
PD-L1国内检测现状和目前存在的问题
2014年以来，美国FDA已批准了多个针对不同适应症的免疫治疗药物。自2018年国内首个PD-1单抗纳武利尤单抗（nivolumab）上市后，目前我国共有5种PD-1/PD-L1单抗获得上市批准分别用于不同瘤种适应症。不同的免疫治疗药物会有不同抗体的克隆号、不同的检测平台和不同的临床阈值进行评判，使得PD-L1的检测变得复杂多样和难以控制：比如不同的检测平台类型有罗氏的ventana平台和Dako的Link 48的平台，不同生物学行为和状态导致的肿瘤之间和肿瘤内部的PD-L1的表达也存在着差异，组织和标本的不同也会导致PD-L1检测结果的差异。
PD-L1检测流程
虽然PD-L1免疫组化检测存在以上问题，但在检测流程上无论是使用什么抗体和检测平台基本大致相同，下面就以PD-L1 28-8型号抗体在Autostainer Link48上的操作为例，来介绍一下PD-L1免疫组化的检测流程。
● 首先要选择合适的蜡块进行免疫组化的操作，如果是穿刺标本或细胞学的蜡块标本，考虑组织小的原因就不需要进行蜡块挑选，但对于手术切除标本需要先在HE染色切片上观察肿瘤细胞的数量，尽量避免坏死多、有挤压的蜡块。
● 蜡块挑选好以后进行切片，切片厚度一般是4~5 μm，58℃烤片1个小时后进行脱蜡。如果是外院切好的白片，一般来说超过3年的蜡块由于抗原决定簇的丢失，不宜进行PD-L1的检测，潮湿环境中发霉的蜡块也不宜进行PD-L1的检测。
● 处理好的切片在上免疫组化仪前需要进行抗原修复，该过程有专用的抗原修复液，修复方法和普通的免疫组化相同，抗原修复时间根据各自的实验室的条件来进行。抗原修复完成后将切片放到Autostainer Link48免疫组化仪上进行操作，操作流程根据仪器说明书进行设置运行即可。
● 值得注意的是，在检测过程中一定要设置阳性对照和阴性对照，阳性对照推荐采用组织芯片的方式，其中应该包括扁桃体组织和胎盘组织，阴性对照则采用PBS替代单抗。
● 以上操作完成后，移出切片进行苏木精复染，染色完成后交给诊断医生进行镜下判读。判读前首先要观察阳性对照和阴性对照，只有阳性和阴性对照达到了要求，才能进行肿瘤的PD-L1的判读。一般来说PD- L1判读至少需要100个肿瘤细胞，当组织样本中肿瘤细胞数量不足100时，应在报告中注明检测的肿瘤细胞的数量以供临床医生参考。
由于不同免疫治疗的药物对应不同的检测抗体和平台，因此实验室应尽量使用国际认可的检测方法和平台进行PD-L1的检测。但是由于检测的平台和方法较多，国内很多实验室不能满足检测的要求，所以在国内应尽快建立一套完整的PD-L1实验室检测规范以利于免疫治疗的开展。
NP/IO/4226/09/27/19-09/26/20