随着免疫治疗药物在国内的适应症越来越广泛，以及PD-L1抗体DAKO 22C3和DAKO 28-8在国内的获批，PD-L1免疫组化规划检测在病理一线工作中尤为重要，但不同药物所使用的PD-L1抗体的克隆号和检测平台不同，从而可导致PD-L1免疫组化的质控受到影响。为此，91360特邀武汉大学人民医院袁静萍教授就PD-L1的免疫组化质控问题进行采访。

　　袁静萍教授：由于目前批准的免疫检查点抑制剂采用的PD-L1伴随诊断或补充诊断是采用不同克隆号的PD-L1抗体和检测平台进行的，这样就导致了这些检测结果的一致性问题。虽然从Blueprint计划1期和2期结果显示Dako公司的28-8和22C3、罗氏公司的SP263和SP142具有较好的一致性，但是，国内目前的现状是同时拥有Dako和罗氏公司的免疫组化检测平台还较少，也有很多单位还是手工操作，这样的检测结果是否可靠还未得到验证和认识。在PD-L1免疫组化结果的判读上，大多数单位病理医生虽然通过各种途径了解和熟悉，但并未能进行规范化培训，针对不同检测平台、不同克隆号的抗体甚至不同瘤种，其判读标准都存在差异，从而也会导致判读结果的主观性。目前，大多数医院病理科的抗体处于赠送试用阶段，也会出现抗体供应不及时，影响病人检测的情况，另外，抗体正式获批后的定价，该项检测费用的高低也将成为病人能否检测的关键因素之一。最后，中国尚未出台PD-L1规范化检测的相关共识，这也使各单位没有统一的标准参考。

　　袁静萍教授：的确，我们注意到了NCCN非小细胞肺癌指南对PD-L1检测的推荐，突出了PD-L1检测对免疫治疗的指导价值，这也对病理医生在PD-L1免疫组化的检测过程提出了更高的要求，即病理医生需要向临床医生提供更加准确的PD-L1免疫组化检测结果。很好的质控对于检测结果具有非常重要的作用。我认为，质控无大小，任何一个环节质控没有做好，都可能影响PD-L1的免疫组化检测结果。具体来说，从标本开始固定就需要标准的4%的中性福尔马林液固定，固定时间应为12-24小时，固定液应为组织样本的5-10倍，组织处理过程的浸蜡温度应控制在60℃或以下，切片厚度应为4~5μm厚，58±2℃下烘干1小时等。在染色过程中，应使用专门的抗原修复液，使用的抗体克隆号和检测平台需要对应等等，其中还有对照片的选择，质控对照片是反应整个技术流程是否标准的非常重要的一环，常规是要求每个切片都要设置相应的对照片。当然，除了技术相关的质控，判读标准的质控也非常重要。

　　袁静萍教授：目前各种文献、指南均推荐使用扁桃体或胎盘组织作为PD-L1免疫组化检测的阳性对照，我们也是根据这些指南推荐使用的。根据我们的经验，胎盘组织PD-L1表达阳性强度要高于扁桃体，但表达强度基本一致；而扁桃体表达呈现出强弱不等的表达。在扁桃体中，大多数生发中心巨噬细胞呈现弱到中等强度的点状胞膜染色，大多数上皮隐窝细胞呈现中等到强的染色，而大多数淋巴细胞(外套层和生发中心B细胞)和浅表上皮细胞无染色，这种不同强度的表达方式有助于我们对肿瘤组织进行判读。因此，我更倾向于采用扁桃体作为阳性对照组织。当然，每个单位和个人均可以根据自己的习惯采用适合的阳性对照组织，但原则上应采用上述2种组织，这样检测结果才能具有可比性。同时，我们还需要设置病人自身标本的阴性对照及常规未有抗体标记的扁桃体或胎盘组织的阴性对照，以排除自身因素产生的干扰。

　　袁静萍教授：PD-L1免疫组化检测结果的判读中，我认为以下几个方面需要进行质量控制的。一是检测组织中的肿瘤细胞数量。根据文献或指南，对于PD-L1检测至少需要计数100个活的肿瘤细胞，这样检测结果才具有可靠性。然而，并不是所有样本均符合这个要求，所以，当肿瘤细胞数量不足100时，应该在检测报告中明确注明样本中的肿瘤细胞数量，这样才能有助于临床医生的治疗决策。二是确定什么才是阳性表达。PD-L1的阳性表达必须是细胞膜阳性，而不管其强弱程度。如果出现细胞质阳性或模糊不清的阳性时，均不能判读为PD-L1表达阳性。三是需要避免误判。肿瘤组织内会有一些巨噬细胞，这种情况在肺癌内特别明显。肺泡腔内的巨噬细胞会表达PD-L1，此时不应将其误认为肿瘤细胞阳性而判读为PD-L1阳性。还有，坏死周围及切片周围的肿瘤组织也可有PD-L1表达，这个可能为坏死组织内的抗原弥散或边缘效应而导致的假象，应避免判读为阳性。肺是开放性器官，经常会有一些碳尘颗粒等沉积，会误认为是PD-L1表达，也需要进行鉴别。最后，组织内的挤压也会导致PD-L1表达，也不能将其判读为阳性。

　　袁静萍教授：质控是一项重要的工程，质控工作永远在路上。我个人认为，PD-L1的免疫组化质控不仅仅是个人或单位的事情，各级学术组织尤其是各省市的病理质控中心需要承担起组织和实施的工作。可以不定期地举办PD-L1免疫组化检测和判断培训班，通过培训，提高各个单位病理科的PD-L1的检测和判读水平。对于每个病理科，如有条件，应由专门的病理技术员和病理医生进行PD-L1的检测工作，这样可确保检测条件和判读的一致性。还有，与临床医生积极配合和联系，以便不断提高PD-L1判读准确性。