肺癌分子检测样本采集及处理是确保后续基因检测的关键和基础。样本的先期处理更是所有后续检测的根本保证，不规范的处理会导致检测结果不准确，会对患者最后用药造成很大影响。

　　目前肺癌分子检测主要是从样本中提取DNA和（或）RNA，用于后继的基因检测。常见的检测标本类型有新鲜组织、石蜡包埋组织（FFPE）、胸水、外周血几种，各种样本处理方法也不尽相同。实验室可参照《个体化医学检测质量保证指南》、《中国非小细胞肺癌患者EGFR T790M基因突变检测专家共识》等文献[1,2]，结合自身的情况，与送检的临床科室、物流人员相互配合，建立详细的样本运送和保存流程，形成自己的标准操作规程（SOP）。

　　实验室应建立详细的样本运送，SOP，对临床医生提供样本及样本采集手册，要求物流人员填写相关运送记录表，确保送检过程中样本的安全性和过程的可控性。下面对不同样本的处理方式做一简述，供大家参考。

　　

　　新鲜组织是指手术和活检组织，包括粗针穿刺和细针穿刺的组织。这类样本一般都是取活检的一部分，其余部分要做FFPE样本，以明确诊断。如果不立即提取核酸，可以先将组织在离体后30分钟内存放到-80癈冰箱或液氮中保存。也可迅即将组织切成小块，放入5倍体积的RNALater样品储存液中，放4癈或-20癈保存。保存时要使用冻存管。如需将样本转送至院外，要用干冰运送，中间要保证冷链运输，防止冻融。新鲜组织也要采用冰冻切片、细胞涂片、印片或用其余的FFPE等方法，明确或近似推断其中肿瘤细胞的含量。

　　

　　10%中性福尔马林固定手术切除样本，按病理学操作规范进行取材。制作石蜡切片时，切取5片连续切片，其中1片进行HE染色，确认肿瘤细胞的含量。DNA容易受固定的影响，样本长时间（1周以上）浸泡在福尔马林中，会使其DNA片段化，影响检测。手术标本的固定时间一般是24小时，对于穿刺等活检样本，固定时间控制在6~24小时为佳[1-2]。

　　肿瘤细胞含量的要求可参看相应检测试剂盒的说明书，PCR法和二代测序法一般要求在20%以上。对于肿瘤细胞含量低于厂商要求的样本，实验室内可针对检测方法，先行设计实验，对这类样本做出本实验室的检测限，形成相应的SOP，应用于以后的工作中。

　　

　　穿刺获得胸腹水样本提交给细胞病理检查之后，剩余液体冷藏/冷冻保存。也可在含有细胞成分的离心沉淀中加入含有蛋白质变性剂的缓冲液（如AL缓冲液，Qiagen公司），室温保存。胸水也可以考虑cfDNA保护管储存运输。胸水中的肿瘤细胞含量差别很大，有时有非常充足的肿瘤细胞可供检测，有时只有零星或少量肿瘤细胞。肿瘤细胞量多时，可用离心后的沉淀做分子检测。既可做新鲜标本的检测，也可制成细胞块检测。肿瘤细胞过少，或只在涂片中找到疑似的肿瘤细胞，如果患者已经明确患有非小细胞肺癌，可考虑做液体活检检测（处理原则同血浆样本，见下）。

　　

　　循环DNA(circulating free DNA，cfDNA)是存在于血浆中的游离DNA，肿瘤来源的DNA占血浆游离DNA的比例在不同肿瘤及病例中相差悬殊（0.01~93%），从而限制了外周血在肿瘤分子检测的准确性。目前已有多篇文献证实可利用从血浆游离DNA检出突变，但需要使用数字PCR或二代测序法等灵敏度较高的检测方法。外周血取样时应使用一次性密闭EDTA抗凝真空采血管（Streck管或BCT管），采集6~10ml全血。避免大幅震动，冷藏运输，可保存3-7天。但最好在2小时内分离血浆，提取游离DNA，保存到-80℃冰箱中，并避免反复冻融造成cfDNA降解。提取cfDNA可用微量DNA提取试剂盒。对于商品化核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。

　　综上所述，规范化的肺癌分子病理检测的标本处理流程是后续检测质量的根本保证。数字PCR及NGS等高灵敏度的方法，可以用于肿瘤细胞/基因含量相对较低的样本。ARMS-PCR方法适宜院内检测组织及细胞学标本，可为临床快速精准地提供用药指导。因此，在保证结果准确可靠的前提下，不同标本可选择适用不同的突变检测方法。

　　

1. 个体化医学检测质量保证指南。https://max.book118.com/html/2018/1028/7113166125001154.shtm

2. 中华医学会病理学分会, 国家病理质量控制与指导中心, 中华医学会肿瘤学分会肺癌学组,等. 非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（2021版）. 中华病理学杂志, 2021, 50(4): 323-332.
 

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