由于透射电镜能观察的样品必须很薄（60～70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格。

实验目的：掌握流式细胞术分离T、B细胞的原理与方法。

流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度

免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons等（1950）建立的一门学科。经过近43年的发展，免疫荧光技术与形态学技术相结合，逐渐发展成免疫荧光细胞（或组织）

在生物医学和临床研究实践中，经常需要检测两种不同物质是否在同一样品中共存或同一种细胞中共存，因此出现了免疫组织化学双重染色。

肾穿刺活检对患者的损伤小，获取的肾组织新鲜，将肾穿刺活检标本进行病理检查对肾脏疾病类型的诊断、治疗和预后判断具有无可替代的作用。

免疫荧光检查是肾活检诊断必不可少的手段之一。然而，行免疫荧光检查的冰冻组织常无肾小球，如何弥补这一缺憾，文献有众多方法。

组织切片伴随着显微镜技术和免疫实验等的发展而得到广泛的应用。本文对其中的冰冻切片、石蜡切片、碳蜡切片、超薄切片、塑料切片等几种常用的实验方法相关操作步骤进行介绍。

常规病理制片是病理切片技术最重要的部分，分取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、封片等几个主要步骤。本文主要就切片过程中染色这一步骤做详细的介绍。

粗切的厚度大约在50～100微米左右，质地较硬的组织或较小的组织应再薄一些，粗切致组织全部暴露后，才进行细切。

临床常规免疫组化检测通常采用辣根过氧化酶显色系统（即DBA显色），阳性反应呈棕黄色颗粒。但在黑素瘤组织中，免疫组化阳性的棕黄色颗粒常与组织原有黑素颗粒混淆，难以鉴别，若黑素颗

切片在经过染色时脱水不充分，或者在进入二甲苯透明的时候被水滴污染，为大家介绍一种方法，既可消除混在二甲苯中的水份，又可清晰反映出混在二甲苯中的水份多少，提示是否需要更换。

本文综述了电镜原位分子杂交技术的建立及其分类，并详细介绍了非放射性电镜原位分子杂交技术的基本操作程序及注意事项，最后对电镜原位分子杂交技术的应用做了简要介绍。

意大利学者Tanca等在2012年发表的文章满怀信心地用了“让石蜡组织中的蛋白质获得自由”的题目，他总结了抗原修复技术的基本原则在蛋白质组学研究时代正在和即将继续发挥的重要作用。

抗原热修复的标准化是至关重要的，为此，我们也同时提供了浙江大学第一附属医院病理科丁伟主任关于修复时间及流程的严谨的实验及结果。

不切当的抗原修复修复方法或者选择的修复液不恰当均可导致免疫组织化学结果的假阳性或假阴性。因而，控制好抗原修复的影响因素，可以在一定程度上提高诊断的准确率。

抗原修复在免疫组化过程中是至关重要的一步，抗原修复是否合适对免疫组化染色结果的影响极其重大。

目前认为影响抗原修复的两个基本因素是：抗原修复温度和修复液的pH值，抗原修复技术的发明主要归功于生物化学家对蛋白质与甲醛化学反应的深入研究。

切片时要防止冰晶产生，冰晶是由脑组织脱水后残存的水分子结冰形成。从水的物理性质中可以看出，水在－4℃时体积最大，这意味组织在－4℃停留时间越

组织固定的原理主要是在不影响酶、抗原活性的情况下固定液快速渗入组织内，使蛋白质快速凝固，阻断细胞的新陈代谢，而对糖原、核酸和碳水化合物起到保护作用。