组织只要是经过适当的固定、脱钙(如果需要),完全脱水,透明和浸蜡等程序,切制时切片刀锋利以及切片机调整合适,有99 9%的组织都切割制出相当好的切片。
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。
1975年,Huang报告用蛋白酶消化石蜡切片以提高乙型肝炎病毒抗原的免疫组化检测效果。此后,酶消化法便被用于一些抗原的免疫组化检测并收到一定效果。
在外科送检的诸多材料中,对于每一例病例的材料,大小都不一样,但对于较大的标本,不可能都对其进行制作切片,因此,选择适合于病理技术制作……
透射电子显微镜在材料科学 、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,样品的密度、厚度等都会影响到最后的成像质量,必须制备更薄的超薄切片,通常为50~100nm。
电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样,所不同的是前者用电子束作光源,用电磁场作透镜。另外,由于电子束的穿透力很弱,因此用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。
电镜是利用电子束作为成像光源,由于普通透射电镜电子束穿透能力很弱,无法穿透1um厚度的薄片,所以必须把标本切成厚度小于0 1um以下的薄片才能适用,这种薄片称为超薄切片。
优良的切片技术取决于所有器械的透彻了解和丰富的实践经验。实验工作的每一方面都需熟练的技巧。如果早期练习草率不当,多年后还会反映出来,要是达到了训练的高标准,
为了在同一张组织切片或细胞学涂片上同时或先后显示两种或两种以上的抗原,发展了双重和多重免疫组化技术。这对于在原位了解不同抗原的关系,将形态与功能相结合极为有用。
酶标抗体与荧光色素标记抗体不同,它需借助桥-偶联剂的作用,将酶连结在抗体分子上。
若想得到理想的ICC染色结果、正确地判断抗原物质在组织细胞内的位置,除需有良好酶和抗体外,保持组织细胞内抗原物质的不动性(Immobility)和免疫活性也是至关重要的。
当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后,必须将一部分杂交瘤细胞保存,否则在连续传代的过程中,可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。
包埋,就是将已经经过固定,脱水,透明,浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内,包埋成块,使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却,这个程序称为包埋。
组织经媒剂的透明作用之后,移入熔化的石蜡内浸渍,石蜡逐渐浸入组织间隙,取代透明剂,这一程序就叫浸蜡。根据所用石蜡的熔点,浸蜡需要能够保持于54-60℃温箱内进行。
切片法,是利用锐利的刃具将组织切成极薄的片层,材料须经过一系列特殊的处理,如固定、脱水、包埋、切片、染色等,过程十分繁复。
组织脱水后,还要经过一个浸蜡的媒剂透明过程。目的是使石蜡渗透到组织中去,达到包埋的支持作用。常用的脱水剂如酒精等,不能溶解石蜡与之相混合,
脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分,为下一步透明及浸蜡创造条件。此外,脱水还可以使组织再次发生一定的硬化,脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)是近代生物医学图像分析仪器研究最重要的成就之一,
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A G(ProteinA G)或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育。
《支气管与肺细胞病理学诊断》收录大量正常支气管与肺细胞学形态及炎症、癌前病变和癌导致的细胞学改变图片,可供病理科、呼吸科医师及相关科研人员阅读参考。
《妇产科病理学》对女性生殖道疾病的病理学知识进行了系统的阐述。
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